Le saut d’exon (exon-skipping) a pour objectif de supprimer la partie du gène comprenant la mutation afin de rétablir le cadre de lecture et de permettre à la cellule de fabriquer la protéine manquante (la dystrophine). Récemment, Luis Garcia et son équipe (Généthon à Evry) ont réussi grâce à cette technique du saut d’exon (mono-exon) à rétablir la production d’une dystrophine tronquée mais fonctionnelle chez la souris. Pour ce faire, les chercheurs ont utilisé un vecteur AAV (adeno associated Virus) qui a permis d’introduire dans la cellule le gène U7 produisant un petit ARN (du noyau cellulaire). Celui-ci va masquer l’exon défectueux et ainsi rétablir le cadre de lecture dans la cellule. Après injection intra-musculaire ou perfusion intra-artérielle de ce couple AAV-U7 chez la souris mdx, l’expression de la dystrophine a été restaurée dans les plupart des fibres musculaires et les capacités motrices des animaux traités étaient équivalentes à celles des animaux sains.
La suite de ces travaux a été présentée au cours du congrès Myologie 2005 par Luis Garcia. Un an après, le niveau d’expression de la dystrophine est toujours stable dans les muscles de souris traitées par le saut d’exon (AAV-U7). De plus, les chercheurs ont commencé à appliquer cette même technique du saut d’exon chez le chien GRMD (modèle de la DMD). Il est à noter que chez ce modèle animal, il est nécessaire de « sauter » plusieurs exons (saut multi-exons) pour rétablir le cadre de lecture. Le saut multi-exons ainsi testé in vivo, ouvre de nouvelles perspectives thérapeutiques chez les patient DMD pour lesquels le saut mono-exon est insuffisant. Par ailleurs, les chercheurs ont développé de nouveaux vecteurs (AAV et lentivirus) destinés à être utilisés chez l’homme. Ces résultats majeurs permettent d’envisager à présent l’application du saut d’exon thérapeutique chez l’homme.
> Jeudi 12 mai (matin), conférence plénière de Luis Garcia (Correction pérenne d'une forme de dystrophie musculaire à l'aide d'un AAV couplé à un saut d'exon thérapeutique très efficient).

La technologie au service de la visualisation du muscle Lors du congrès de Myologie 2005, D. Stockholm (Généthon, Evry) a présenté les résultats de travaux concernant de nouvelles stratégies d’imagerie associant l’utilisation de microscopes fluorescents et de protéines chimériques fluorescentes récemment développées. Cette nouvelle technologie a pour but d’étudier les muscles squelettiques au niveau macroscopique, sub-cellulaire, aussi bien qu’au niveau moléculaire chez la souris vivante.

De telles prouesses technologiques ouvrent des perspectives considérables d’une part, pour l’étude des processus physiologiques et pathologiques et d’autre part pour l’évaluation des thérapeutiques in vivo chez les petits animaux. L’animal devient ainsi son propre contrôle pour le suivi des nouvelles thérapeutiques et il n’y a donc plus de nécessité à le sacrifier.
> Jeudi 12 mai, 15h, communication de Daniel Stockholm (Imagerie par fluorescence du muscle squelettique chez la souris in vivo : de l’observation de l’organe à la détection de l’activité moléculaire).

Les cellules adipeuses, thérapie de demain ? Longtemps considéré comme un simple organe disgracieux de stockage des lipides, le tissu adipeux se révèle, depuis peu, être un véritable réservoir de cellules souches, capables de donner naissance à des cellules cardiaques, vasculaires, osseuses,voire musculaires... En injectant des cellules souches de tissu adipeux humain, des équipes de chercheurs du CNRS et de l'Inserm ont réussi à régénérer des cellules musculaires humaines, sans réaction de rejet.

Ces travaux prometteurs chez la souris ont été présentés jeudi 11 mai au congrès Myologie 2005. Ils représentent un réel espoir dans le traitement de pathologies musculaires, notamment les myopathies de Duchenne, une maladie héréditaire grave se traduisant par une atrophie progressive de tous les muscles.
En 2004, l'équipe CNRS-Inserm de Louis Casteilla avait démontré qu'il était possible d'obtenir, in vitro, des cellules cardiaques à partir de cellules adipeuses. Parallèlement, les équipes Inserm de Bernard Lévy en collaboration avec l'équipe de Louis Casteilla et l'équipe de Anne Bouloumié montraient que ces mêmes cellules pouvaient chez la souris se transformer en cellules constituant les vaisseaux sanguins.
En 2005, les équipes de Christian Dani, chercheur Inserm et directeur du laboratoire «Cellules Souches et différenciation» et Gérard Ailhaud, UMR 6543 CNRS (Institut de signalisation, biologie du développement et cancer) ont réussi à obtenir, à partir de tissu adipeux de jeunes donneurs, des cellules souches multipotentes dénommées hMADS («Human Multipotent Adipose Derived Stem Cell»). Les résultats ont montré qu’une cellule souche hMADS est capable de donner naissance in vitro à une cellule musculaire, osseuse, adipeuse ou de cartilage, en fonction de son environnement.
Transplantées en faible quantité chez la souris mdx (modèle animal de la dystrophie musculaire de Duchenne), ces cellules souches du tissu adipeux n'ont pas été rejetées en l'absence de traitement immunosuppresseur et ont conduit à une expression importante et à long terme de dystrophine humaine. Selon le Pr Gérard Ailhaud, « ces résultats prometteurs ouvrent des perspectives d'allotransplantation de telles cellules chez des patients atteints de maladies musculaires. » Ces travaux ont donné lieu au dépôt d'un brevet international.
> Jeudi 12 mai, 16h15, communication de Louis Casteilla (Tissu adipeux : un réservoir de cellules souches à visée thérapeutique).

Le PTC124 : une piste thérapeutique pharmacologique prometteuse pour la dystrophie musculaire de Duchenne La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie neuromusculaire due à des mutations dans le gène de la dystrophine. Dans 15% des cas, les mutations provoquent la formation d’un codon stop* prématuré (CSP), entraînant la synthèse d’une dystrophine incomplète et non fonctionnelle. Une des stratégies thérapeutiques pour la DMD consiste à empêcher la machinerie cellulaire de reconnaître ce signal stop pour qu’elle continue à synthétiser la protéine jusqu’à la fin. Ce processus s’appelle la « translecture » du CSP. Dans cette optique, le professeur Lee Sweeney (Université de Pennsylvanie à Philadelphia) et son équipe ont testé l’efficacité du PTC124 (une drogue capable de translire les CSP) sur les souris mdx.

La prise orale quotidienne de PTC124 a entraîné la suppression du CSP pathologique chez la souris mdx et a rétabli l’expression de la dystrophine. De plus, le PTC124 a restauré partiellement les performances fonctionnelles des animaux. Après avoir confirmé l’efficacité du PTC124 sur les CSP chez des rats et des chiens, les chercheurs ont réalisé un essai clinique de phase I sur des personne saines. Cet essai randomisé, en double aveugle, et contre placebo a montré que le PTC124 était bien toléré jusqu’à la dose de 100mg/kg et n’induisait pas la translecture de codons stops naturels dans d’autres gènes. Ces résultats très encourageants ont poussé l’équipe de Lee Sweeney à mettre en place un projet d’essai clinique de phase II pour des patients atteints de DMD. Un protocole a été proposé et la discussion est en cours avec la FDA (Food and Drug Administration). Ces travaux représentent une grande avancée thérapeutique à la fois dans la DMD et d’autres maladies comme la mucoviscidose et l’hémophilie. C’est la première fois que des chercheurs ont réalisé une correction génétique tout simplement par voie orale. * Un codon stop est un petit morceau d’ADN (trois nucléotides) qui ne code aucun acide aminé mais désigne la fin du message génétique sur un ARN messager et par conséquent la fin de la synthèse de la protéine.
> Jeudi 12 mai, 17h30, conférence plénière de Lee Sweeney (Suppression des codons avec stop prématuré).